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第1篇：動(dòng)物行為學(xué)的意義范文

[關(guān)鍵詞] 五味子乙素；高效液相色譜；藥代動(dòng)力學(xué)；性別差異

[中圖分類號(hào)] R914[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1674-4721（2012）03（b）-0011-03

木蘭科植物五味子（Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.）具有補(bǔ)腎寧心、收斂固澀、益氣生津等功效[1]。陳延鏞等[2]較早對(duì)五味子進(jìn)行了系統(tǒng)研究，證明其主要有效成分是木質(zhì)素類。木質(zhì)素類成分具有揮發(fā)性，因此筆者采用超臨界CO2萃取得到五味子揮發(fā)油[3]，以供試驗(yàn)用，具體制法本文不再贅述。五味子揮發(fā)油包含五味子中大多數(shù)有效成分，有鎮(zhèn)靜、保肝、擴(kuò)血管、抗衰老、祛痰和鎮(zhèn)咳等作用[4-5]，而五味子乙素是最重要的有效成分，具有多種藥理活性[6-9]。魏斌斌等[10]曾對(duì)五味子乙素在大鼠體內(nèi)進(jìn)行了藥代動(dòng)力學(xué)研究，但沒有發(fā)現(xiàn)其藥代動(dòng)力學(xué)的性別差異。Tie Zhao等[11]發(fā)現(xiàn)了五味子乙素在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的性別差異，并采用單純集聚數(shù)據(jù)分析法進(jìn)行了初步研究。由于中藥、天然藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究未出臺(tái)相應(yīng)的技術(shù)指導(dǎo)原則，本文參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《化學(xué)藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》要求“動(dòng)力學(xué)研究最好從同一動(dòng)物多次取樣，盡量避免用多只動(dòng)物合并樣本”，進(jìn)一步對(duì)五味子乙素在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征進(jìn)行隨機(jī)分組對(duì)照試驗(yàn)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

LC-10 AT型液相色譜儀配SPD-10 A型紫外檢測(cè)器（日本島津公司）；Anastar色譜工作站（奧特塞恩斯儀器有限公司）。

1.2 試藥

內(nèi)標(biāo)黃體酮和五味子乙素對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為：1173-040110和100027-200307；乙腈和甲醇為色譜純；水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純；肝素鈉由天津市生物化學(xué)制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：20101115。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

體重180～220 g的Wistar大鼠，雌性6只，雄性6只，由沈陽藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：迪馬C18柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（80∶20）；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm；進(jìn)樣量為20 μL。在此色譜條件下，五味子乙素色譜峰與相鄰色譜峰分離度均大于1.5，拖尾因子在0.95~1.05之間，理論塔板數(shù)大于8 000，符合測(cè)定要求。

2.2 對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液取五味子乙素對(duì)照品，精密稱定，用甲醇溶解得126.0 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再于不同的量瓶中用甲醇稀釋成五味子乙素濃度分別為0.404、0.756、1.512、3.150、6.300、8.190、12.600 mg/L的系列對(duì)照品溶液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液取黃體酮對(duì)照品，精密稱定，用甲醇溶解得125 mg/L內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，再用甲醇稀釋成5 mg/L的內(nèi)標(biāo)溶液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 血漿樣品預(yù)處理

將200 μL大鼠血漿樣品置1.5 mL的離心管中，依次加入內(nèi)標(biāo)溶液20 μL，乙腈400 μL，渦旋3 min，再以8 000 r/min離心10 min，分離出上清液，用氮?dú)獯蹈?，再用甲?00 μL復(fù)溶，渦旋混合5 min，然后8 000 r/min離心10 min，取上清液20 μL進(jìn)樣測(cè)定。

2.4 專屬性試驗(yàn)

空白大鼠血漿樣品、空白血漿+對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)、灌胃2.5 h后的血漿樣品+內(nèi)標(biāo)的典型色譜圖見圖1。由圖可見，五味子乙素和內(nèi)標(biāo)的測(cè)定不受雜質(zhì)干擾。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量下限

取空白血漿200 μL多份，分別加入五味子乙素系列對(duì)照品溶液各20 μL，再在每份樣品中各加黃體酮溶液20 μL，得到五味子乙素濃度分別為40.40、75.60、151.20、315.00、630.00、819.00、1 260.00 μg/L的對(duì)照品血漿樣品。在上述條件進(jìn)樣測(cè)定，以五味子乙素與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值Y（Ai/As）為縱坐標(biāo)，五味子乙素的濃度X為橫坐標(biāo)，1/X2為權(quán)重系數(shù)，用加權(quán)最小二乘法[12]進(jìn)行線性回歸運(yùn)算并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，典型的回歸方程為：Y = 0.002 3X-0.032 3，r ＝ 0.998 6（n ＝ 7）。結(jié)果表明，五味子乙素血漿樣品在40.40～1 260.00 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。當(dāng)信噪比（S/N）為10時(shí)，本方法的定量下限可達(dá)40.40 μg/L。

2.6 精密度與準(zhǔn)確度

取空白大鼠血漿，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法配制低、中、高3個(gè)濃度（75.60、315.00、1 008.00 μg/L）的五味子乙素血漿樣品，每個(gè)濃度6樣本分析，連續(xù)測(cè)定3 d。結(jié)果，低、中、高3個(gè)濃度的日內(nèi)精密度（RSD）分別為4.68%、4.32%、6.29%，日間精密度（RSD）分別為6.59%、7.40%、9.86%。

2.7 回收率試驗(yàn)

2.7.1 相對(duì)回收率試驗(yàn)將“精密度與準(zhǔn)確度”項(xiàng)下測(cè)得的低、中、高3個(gè)濃度的對(duì)照品血漿樣品溶液峰面積代入當(dāng)日回歸方程，計(jì)算五味子乙素的質(zhì)量濃度，與相應(yīng)實(shí)際量比較，得低、中、高3個(gè)濃度的平均相對(duì)回收率分別為95.92%、99.04%和101.30%。

2.7.2 絕對(duì)回收率試驗(yàn)取甲醇（代替空白大鼠血漿）200 μL，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量下限”項(xiàng)下方法處理，制成低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度（75.60、315.00、1 008.00 μg/L）的五味子乙素血漿樣品，進(jìn)樣測(cè)定得到3種濃度五味子乙素的峰面積和內(nèi)標(biāo)的峰面積，每個(gè)水平重復(fù)6次。將“精密度與準(zhǔn)確度”項(xiàng)下測(cè)得的低、中、高3個(gè)水平的對(duì)照品血漿樣品溶液各峰面積與上述測(cè)定的峰面積進(jìn)行比較。結(jié)果，低、中、高3個(gè)水平五味子乙素的絕對(duì)回收率分別為65.41%、66.47%、63.75%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取空白大鼠血漿，同上處理得低、中、高3個(gè)濃度（75.60、315.00、1 008.00 μg/L）的對(duì)照品血漿樣品，用3個(gè)濃度考察3次冷凍融解循環(huán)、常溫放置24 h以及-20℃冷藏14 d后對(duì)照品的穩(wěn)定性，每個(gè)濃度在同一條件下分析6個(gè)樣本。結(jié)果3種條件下測(cè)得對(duì)照品濃度的RE%均在±8%之內(nèi)，表明樣品在上述條件下穩(wěn)定性良好，可以滿足測(cè)定的需要。

2.9 藥代動(dòng)力學(xué)研究

2.9.1 灌胃液的制備取0.5 mL聚吐溫-80和4 g五味子揮發(fā)油，置于25 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻即得。HPLC法測(cè)定五味子乙素濃度為10.2 mg/mL。

2.9.2 給藥方法Wistar大鼠12只，按照性別分成兩組。實(shí)驗(yàn)前禁食1 h，自由飲水，口服給予灌胃液適量（相當(dāng)于五味子乙素100 mg/kg），分別于給藥前和給藥后，雌性各組分別于0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、8、10、14 h眼眶后靜脈叢取血0.4 mL，雄性各組分別于0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、8 h同法取血。置于肝素化的錐形離心管中，4 000 r/min離心10 min，分離血漿，-20℃存放備測(cè)。

2.9.3 數(shù)據(jù)處理與分析測(cè)定上述各時(shí)間點(diǎn)的血漿中的藥物濃度，繪制血藥濃度-時(shí)間曲線，圖2。用實(shí)測(cè)值表示峰濃度和達(dá)峰時(shí)間，用DAS 2.0軟件處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)后得出半衰期等其他藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，見表1。

3 討論

Tie Zhao等[11]以大鼠作為試驗(yàn)動(dòng)物，采用交叉給藥自身對(duì)照法和單純集聚數(shù)據(jù)分析法（NPD），即多個(gè)體血藥濃度平均值作為該時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度，進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)的分析，這種分析方法無視數(shù)據(jù)的各類差異來源，僅能估算單項(xiàng)參數(shù)的均值。本文采用按照性別分組對(duì)照的試驗(yàn)方法，可以滿足連續(xù)多次采血的要求，也可避免數(shù)據(jù)的來源差異。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用DAS 2.0軟件智能化分析處理，結(jié)果五味子乙素在雌雄大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程均符合二室模型。用t檢驗(yàn)的方法進(jìn)行分析比較，結(jié)果雌雄大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程具有明顯的差異，其中藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)CL/F、AUC（0-t）、AUC（0-∞）、Tmax、Cmax差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.01）。觀察藥-時(shí)曲線和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)列表可以看出，雌性大鼠體內(nèi)的血藥濃度顯著高于雄性大鼠，絕對(duì)和相對(duì)生物利用度比雄性大鼠高約3倍，消除相半衰期比雄性大鼠長(zhǎng)。

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第2篇：動(dòng)物行為學(xué)的意義范文

1.中央國(guó)營(yíng)和公私合營(yíng)的企業(yè)、事業(yè)單位中應(yīng)該實(shí)行學(xué)徒制度的工種、業(yè)務(wù)的名稱表，和各類學(xué)徒學(xué)習(xí)的具體期限、學(xué)習(xí)技術(shù)和業(yè)務(wù)的具體要求，及各類學(xué)徒的最低年齡，由中央各主管部門按照實(shí)際情況分別規(guī)定，經(jīng)勞動(dòng)部審核平衡后發(fā)表執(zhí)行；地方國(guó)營(yíng)和公私合營(yíng)的企業(yè)、事業(yè)單位參照中央國(guó)營(yíng)和公私合營(yíng)的企業(yè)、事業(yè)的規(guī)定執(zhí)行，中央各主管部門沒有規(guī)定的，由各省、自治區(qū)、直轄市人民委員會(huì)另作規(guī)定。

不實(shí)行學(xué)徒制度的工種、業(yè)務(wù)的名稱表，同樣按照上述手續(xù)制定。

2.正式工人、職員因?yàn)樯a(chǎn)和工作需要，改行學(xué)習(xí)別的技術(shù)和業(yè)務(wù)的時(shí)候，以及轉(zhuǎn)業(yè)軍官當(dāng)學(xué)徒的時(shí)候，都應(yīng)該按照內(nèi)部調(diào)動(dòng)工作處理，不實(shí)行學(xué)徒制度。

（二）關(guān)于學(xué)習(xí)期限的計(jì)算、休學(xué)和解除合同

1.學(xué)徒的學(xué)習(xí)期限應(yīng)該自合同生效之日算起。

2.學(xué)徒在學(xué)習(xí)中途因?yàn)樯a(chǎn)和工作需要而改變工種業(yè)務(wù)或者調(diào)換學(xué)習(xí)單位的時(shí)候，其學(xué)習(xí)期限可以合并計(jì)算。

3.學(xué)徒在學(xué)習(xí)中途因故停止學(xué)習(xí)連續(xù)在兩個(gè)月以上的，其停止學(xué)習(xí)期間不計(jì)算為學(xué)習(xí)時(shí)間；不滿兩個(gè)月的，可以計(jì)算為學(xué)習(xí)時(shí)間。但是企業(yè)停工期間可以計(jì)算為學(xué)習(xí)時(shí)間，每年停工時(shí)間長(zhǎng)的行業(yè)在規(guī)定學(xué)徒學(xué)習(xí)期限的時(shí)候應(yīng)該考慮到停工的因素。

4.志愿入伍的軍人復(fù)員后當(dāng)學(xué)徒，其學(xué)習(xí)期限可以適當(dāng)縮短，只要生產(chǎn)或工作需要，本人的技術(shù)、業(yè)務(wù)達(dá)到轉(zhuǎn)正的水平，經(jīng)過考試合格，即可轉(zhuǎn)為正式工人、職員。至于學(xué)習(xí)期限是否需要一個(gè)起碼的期限，由各省、自治區(qū)、直轄市人民委員會(huì)考慮。

學(xué)徒應(yīng)征服兵役復(fù)員后繼續(xù)當(dāng)學(xué)徒的時(shí)候，其學(xué)習(xí)時(shí)間可以前后合并計(jì)算。

5.學(xué)徒因病和非因工負(fù)傷連續(xù)停止學(xué)習(xí)滿六個(gè)月的時(shí)候，應(yīng)該休學(xué)，休學(xué)后在一年內(nèi)身體復(fù)原，可以恢復(fù)學(xué)習(xí)，否則，應(yīng)該解除合同。

6.學(xué)徒開始學(xué)習(xí)后半年內(nèi)，如果發(fā)現(xiàn)患有嚴(yán)重慢性病，不能繼續(xù)學(xué)習(xí)的，應(yīng)該解除合同。

（三）關(guān)于生活補(bǔ)貼

1.學(xué)徒的伙食費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該根據(jù)城市、鄉(xiāng)村、礦山、野外等不同的工作條件，各行業(yè)的特點(diǎn)，和各工種勞動(dòng)強(qiáng)度的差別，由省、自治區(qū)、直轄市人民委員會(huì)規(guī)定幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。

2.學(xué)徒學(xué)習(xí)期為四年的，其第四年的零用錢可適當(dāng)提高一點(diǎn)，具體標(biāo)準(zhǔn)由省、自治區(qū)、直轄市人民委員會(huì)規(guī)定，報(bào)國(guó)務(wù)院備案。

3.學(xué)徒因病和非因工負(fù)傷連續(xù)停止學(xué)習(xí)不滿六個(gè)月的，生活補(bǔ)貼照發(fā)；超過六個(gè)月休學(xué)后，停發(fā)生活補(bǔ)貼。

4.企業(yè)停工期間，學(xué)徒的生活補(bǔ)貼照發(fā)。

5.鐵路、航運(yùn)系統(tǒng)規(guī)定運(yùn)輸部分學(xué)徒的生活補(bǔ)貼標(biāo)準(zhǔn)的時(shí)候，應(yīng)該征求各省、自治區(qū)、直轄市人民委員會(huì)的意見；其所屬工廠中的學(xué)徒，應(yīng)該同樣執(zhí)行省、自治區(qū)、直轄市人民委員會(huì)規(guī)定的生活補(bǔ)貼標(biāo)準(zhǔn)。

6.志愿入伍的軍人復(fù)員后當(dāng)學(xué)徒，其生活補(bǔ)貼按照學(xué)徒生活補(bǔ)貼標(biāo)準(zhǔn)第三年的最高標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，但是不能執(zhí)行第四年的生活補(bǔ)貼標(biāo)準(zhǔn)。

7.某些個(gè)體腦力勞動(dòng)者（如中醫(yī)）培養(yǎng)學(xué)徒，如果習(xí)慣上是由學(xué)徒自備生活費(fèi)用的，仍然可以從習(xí)慣辦理，或者由師徒雙方自行協(xié)商確定。

（四）關(guān)于學(xué)徒參加計(jì)件工作

1.學(xué)徒參加計(jì)件工作的時(shí)候，他所做的那一部分工作量，原則上不計(jì)入師傅（或工組）的工作量之內(nèi)，具體辦法由企業(yè)主管部門制定。

2.學(xué)徒轉(zhuǎn)為正式工人后的第一年，參加工作計(jì)件的時(shí)候，按照本單位生產(chǎn)工人一級(jí)（最低）工資標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算計(jì)件工資；從事個(gè)人計(jì)件工作的時(shí)候，按照本單位生產(chǎn)工人一級(jí)（最低）計(jì)時(shí)工資標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

（五）關(guān)于獎(jiǎng)勵(lì)、津貼和勞保福利待遇

1.學(xué)徒可以享受合理化建議獎(jiǎng)和不屬于工資基金開支的其他獎(jiǎng)勵(lì)。

2.學(xué)徒可以與本企業(yè)職工同樣享受保健津貼（高溫津貼）和出差補(bǔ)助費(fèi)。除此而外，所有野外津貼、林區(qū)津貼，生活費(fèi)補(bǔ)貼、地區(qū)津貼、施工津貼等，學(xué)徒都不能享受。

3.學(xué)徒可以與本企業(yè)職工同樣享受生產(chǎn)和工作所需要的防護(hù)用品。

4.學(xué)徒本人住公家宿舍的時(shí)候，免收房租、水、電費(fèi)。

5.學(xué)徒家庭生活有困難的，不適用職工的困難補(bǔ)助辦法，應(yīng)該由當(dāng)?shù)卣凑丈鐣?huì)救濟(jì)辦法處理。

6.學(xué)徒因病和非因工負(fù)傷醫(yī)療所需要的醫(yī)藥費(fèi)、住院費(fèi)和住院伙食費(fèi)本人負(fù)擔(dān)有困難的時(shí)候，由所在單位酌情補(bǔ)助。學(xué)徒休學(xué)以后，停止享受醫(yī)療補(bǔ)助待遇。

7.學(xué)徒休學(xué)回家所需的路費(fèi)，可由原單位酌情處理。

（六）關(guān)于學(xué)徒轉(zhuǎn)為正式工人、職員后的工資待遇

第3篇：動(dòng)物行為學(xué)的意義范文

【摘要】 目的 觀察補(bǔ)腎化痰法對(duì)AD模型大鼠行為學(xué)的影響并探討其可能機(jī)制。方法 應(yīng)用腦立體定向技術(shù)給大鼠BNM注射凝聚態(tài)Aβ2535＋I(xiàn)BO構(gòu)建AD模型。注射2周后，高、中、低量組分別給大鼠該藥水煎液灌胃；西藥組用哈伯因混懸液灌胃；正常組、空白組、模型組均給予等容積的生理鹽水灌胃。28 d后采用Morris 水迷宮進(jìn)行行為學(xué)評(píng)價(jià)。結(jié)果 行為學(xué)結(jié)果顯示高、中、低量組和西藥組的平均潛伏期較模型組有明顯縮短（P

【關(guān)鍵詞】 補(bǔ)腎化痰法； Alzheimer； 行為學(xué)

【Abstract】 Objective To observe effects and function mechanism of replenishing kidneyessence and removing phlegm therapy on behavior in the rat of AD.Methods Application of technology to stereotactic brain of rats injected BNM condensed Aβ2535 + IBO build AD model. 2 weeks after injection， high， medium and low volume of the rats were administered the drug decoction; western medicine group with Huperzine oral suspension; normal group， blank group， model group were given equal volume of normal saline ig. 28 days after the Morris water maze used for behavioral evaluation.Results Behavioral results showed high， medium and low volume group and western medicine group than the average incubation period of the model group was significantly shorter (P

【Key words】 replenishing kidneyessence and removing phlegm therapy; Alzheimer; behavior

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種以進(jìn)行性記憶障礙和智能衰退為主要臨床特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，隨著人口老齡化的日趨嚴(yán)重，AD已經(jīng)成為危害老年人健康的主要疾病之一［1］，是目前公認(rèn)具有世界性的公共衛(wèi)生事業(yè)重大問題，被稱為“即將到來的21世紀(jì)的瘟疫”［2，3］。目前AD病因和病理機(jī)制尚未完全明了，更無確切療效的藥物。尋找確能根治AD藥物已成為當(dāng)今國(guó)際熱點(diǎn)課題之一。

目前西醫(yī)主要是對(duì)癥治療，治療的目的是延緩AD的進(jìn)展和促進(jìn)神經(jīng)元的功能恢復(fù)以改善癥狀。治療的策略是根據(jù)現(xiàn)有損害神經(jīng)元的各種因素或AD腦中代謝異常來設(shè)計(jì)不同作用位點(diǎn)的各種藥物，但是這些藥物價(jià)格昂貴，毒副作用較大，不能支持老年人用藥的要求［4，5］。中醫(yī)藥在延緩衰老以及衰老相關(guān)疾病的防治方面有著豐富的理論和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，以其療效較好、綜合效益高、副作用少而顯示了良好的前景。為此，我們首先建立了大鼠AD模型，并采用Morris 水迷宮進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，觀察補(bǔ)腎化痰法對(duì)AD模型大鼠行為學(xué)的影響，并用哈伯因混懸液作對(duì)照，旨在進(jìn)一步探討中藥治療AD的作用及機(jī)理。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

15月齡Wistar大鼠70只，雌雄各半，體重450±50 g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。

1.2 主要試劑

Aβ2535和IBO購(gòu)于Sigma公司。

1.3 主要儀器和設(shè)備

Morris水迷宮裝置（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院），腦立體定位儀（北京碩林苑科技有限公司），微量注射器 1 μl（上海醫(yī)用激光儀器廠），電子天平（AL104，梅特勒托利多公司）。

1.4 藥物

補(bǔ)腎化痰方由制首烏、石菖蒲、竹節(jié)參、茯苓、陳皮、半夏、白芥子等組成，購(gòu)自湖北中醫(yī)學(xué)院國(guó)醫(yī)堂門診部。中藥經(jīng)水煎制成濃縮液。哈伯因，購(gòu)自河南眾生制藥股份有限公司豫中制藥廠，批號(hào):060321.

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組

①Aβ2535+IBO模型組（簡(jiǎn)稱模型組），②假手術(shù)組（簡(jiǎn)稱空白組），③正常組， ④哈伯因治療組（簡(jiǎn)稱西藥組），⑤補(bǔ)腎化痰法高劑量組（簡(jiǎn)稱高量組），⑥補(bǔ)腎化痰法中劑量組（簡(jiǎn)稱中量組），⑦補(bǔ)腎化痰法低劑量組（簡(jiǎn)稱低量組）。

2.2 AD模型構(gòu)建

模型組大鼠用2 ％戊巴比妥鈉（40 mg/kg）腹腔注射麻醉后，固定于腦立體定位儀上，顱頂正中切開暴露至顱骨，根據(jù)大鼠顱腦立體定位圖譜，對(duì)基底核立體定位（位置:前囟后 3.8 mm，中線旁開 2.5 mm，深度 3 mm），用牙科鉆鉆開顱骨，用1 μl 微型進(jìn)樣器注射針5 min 內(nèi)緩慢注入Aβ2535+IBO混合液 1 μl，留針10 min.注射完畢后以局部軟組織封閉針孔，縫合皮膚。術(shù)后給予青霉素鈉鹽 5 萬單位肌注，每天1次，連續(xù) 3 d.空白組在定位下給予大鼠BNM一次性注射 1 μl 滅菌生理鹽水。

2.3 給藥

腦內(nèi)注射2周后給藥。給藥量均按人與大鼠體表面積系數(shù)比確定，以臨床人用藥等效劑量為中劑量，模型組、空白組、正常組給予生理鹽水灌胃，1 ml/100 g·d，連續(xù)28 d.西藥組給予哈伯因混懸液灌胃，1 ml/100 g·d，連續(xù)28 d.高量組、中量組、低量組分別給予補(bǔ)腎化痰方水煎液灌胃，含生藥分別是2 g/ml，1 g/ml，0.5 g/ml，1 ml/100 g·d，連續(xù)28 d.

2.4 檢測(cè)指標(biāo)及方法

2.4.1 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 造模結(jié)束后進(jìn)行Morris水迷宮行為檢測(cè)，評(píng)價(jià)其學(xué)習(xí)記憶成績(jī)。主要進(jìn)行定位航行和空間探索實(shí)驗(yàn)。

2.4.1.1 定位航行實(shí)驗(yàn) 定位航行實(shí)驗(yàn)用于測(cè)量大鼠通過一段訓(xùn)練后，對(duì)空間的學(xué)習(xí)記憶能力。每日上下午各4次，將大鼠面向池壁分4個(gè)象限放入水中，記錄其在2 min內(nèi)尋找到平臺(tái)的時(shí)間（逃避潛伏期）。如果大鼠在2 min內(nèi)未找到平臺(tái)，則用手牽引其至平臺(tái)上，讓大鼠停留10 s，計(jì)算機(jī)會(huì)自動(dòng)記錄大鼠在實(shí)驗(yàn)期間的行程，并轉(zhuǎn)換為行程轉(zhuǎn)跡圖，所經(jīng)過長(zhǎng)度、所需的時(shí)間，每個(gè)象限的行程長(zhǎng)度、每個(gè)象限行程的時(shí)間、速度、各個(gè)象限的行程長(zhǎng)度占總長(zhǎng)度的百分比，各個(gè)象限的行程時(shí)間占總時(shí)間的百分比。數(shù)據(jù)的采集和處理由Morris迷宮圖像自動(dòng)監(jiān)視處理系統(tǒng)完成，歷時(shí)4 d.

2.4.1.2 空間探索實(shí)驗(yàn) 5 d撤除平臺(tái)，進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)。將大鼠任選1個(gè)入水點(diǎn)放入水中，記錄其2 min內(nèi)跨越原平臺(tái)位置的次數(shù)。

兩實(shí)驗(yàn)還記錄大鼠在平臺(tái)象限的游泳距離占總距離百分比，池壁20 %和40 %區(qū)域游泳距離百分比，以判斷動(dòng)物記憶儲(chǔ)存及再提取能力。

2.5 統(tǒng)計(jì)處理

所有計(jì)量檢測(cè)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。采用SPSS FOR WINDOWS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件包統(tǒng)計(jì)分析。

3 結(jié)果

3.1 大鼠平均逃避潛伏期

在實(shí)驗(yàn)前兩天，各組動(dòng)物基本圍繞池壁游泳，較少游向平臺(tái)附近，其運(yùn)動(dòng)軌跡呈隨機(jī)分布于各象限之中。但隨著實(shí)驗(yàn)的推進(jìn)，正常組、空白組大鼠依靠空間線索找到平臺(tái)位置的時(shí)間逐漸縮短，其運(yùn)動(dòng)軌跡也慢慢位于平臺(tái)象限，或者在平臺(tái)象限相鄰兩側(cè)的象限尋找，其潛伏期迅速下降。但模型組大鼠除極少數(shù)能找到平臺(tái)外，基本保持前兩天時(shí)的情形，稍有改善。為分析信息獲取能力，測(cè)量了4 d訓(xùn)練的總潛伏期和訓(xùn)練末2 d的后潛伏期。從表1可知，模型組平均潛伏期比正常組和空白組明顯延長(zhǎng)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3.2 大鼠平均游泳距離

定位航行實(shí)驗(yàn)中，觀察了實(shí)驗(yàn)大鼠在實(shí)驗(yàn)平臺(tái)象限的游泳距離占總距離百分比，池壁20 %和40 %區(qū)域游泳距離百分比（分別簡(jiǎn)稱象限百分比、20 %區(qū)域、40 %區(qū)域）(見表2)。從表中可見，模型組大鼠游泳的象限百分比較正常組和空白組大鼠明顯縮短。高、中量組的象限百分比較模型組有明顯提高（P0.05)。進(jìn)一步的組間比較發(fā)現(xiàn)低量組與西藥組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05)。低量組20 %、40 %區(qū)域與西藥組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3.3 大鼠搜索平臺(tái)變化趨勢(shì)

大鼠在尋找平臺(tái)的過程中表現(xiàn)出不同方式，一些大鼠進(jìn)入水池后無目的游動(dòng)，往往速度較快，但經(jīng)常找不到平臺(tái)；還有一些大鼠經(jīng)過幾次訓(xùn)練后，對(duì)環(huán)境的記憶已經(jīng)非常深刻，一入水直接游向平臺(tái)；更多的大鼠在學(xué)習(xí)過程中總是注意觀察周圍的環(huán)境，并識(shí)別水池內(nèi)壁的不同圖形標(biāo)志，根據(jù)標(biāo)志與平臺(tái)的相對(duì)位置去尋找平臺(tái)，這些大鼠總是先游到某一特定的象限，看到標(biāo)志后又到平臺(tái)。從表3中可看出，模型組大鼠空間搜索能力顯著下降，其象限百分比較正常組和空白組明顯縮短（P

3.4 大鼠跨越平臺(tái)的次數(shù)

對(duì)各組大鼠跨越原平臺(tái)位置的次數(shù)進(jìn)行了比較，從表4中可看出，模型組大鼠較正常組和空白組大鼠跨越原平臺(tái)位置次數(shù)明顯下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

4 討論

AD早期表現(xiàn)主要是健忘，并伴有其他高級(jí)功能的障礙，學(xué)習(xí)記憶障礙是AD患者一個(gè)重要的臨床癥狀和特征。AD最早和最重要的癥狀之一是比較突出的近期記憶受損［6］。

Aβ2535和IBO腦內(nèi)注射可以很好地模擬AD行為學(xué)和病理學(xué)表現(xiàn)，但仍缺乏深入的行為學(xué)研究，作者用Morris水迷宮行為評(píng)價(jià)該模型的行為學(xué)特征具有重要意義。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蜉^準(zhǔn)確地反映動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力，可作為檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶水平的重要工具。Morris水迷宮所檢測(cè)的是大鼠在多次的訓(xùn)練中，學(xué)會(huì)尋找固定位置的隱藏平臺(tái)，形成穩(wěn)定的空間位置認(rèn)知，這種空間認(rèn)知是加工空間信息（外部線索）形成的，所形成的記憶是一種空間參考記憶。從信息的加工和提取方式來看，這種空間參考記憶進(jìn)入意識(shí)系統(tǒng)，其儲(chǔ)存的機(jī)制主要涉及邊緣系統(tǒng)（如海馬）以及大腦皮層有關(guān)腦區(qū)，屬于陳述性記憶。而臨床健忘和癡呆的患者，正是陳述性記憶首先受損，而且比較突出。所以從檢測(cè)的記憶屬性來說，運(yùn)用Morris水迷宮行防治此類疾病有效藥物的篩選研究比較恰當(dāng)。通過比較前幾天的訓(xùn)練情況，可以獲得動(dòng)物獲取空間信息的能力和學(xué)習(xí)的能力，而探索實(shí)驗(yàn)可以判斷動(dòng)物記憶儲(chǔ)存能力及提取再現(xiàn)能力。

本實(shí)驗(yàn)采用凝聚態(tài)的Aβ2535和IBO直接注射大鼠BNM建立AD模型，2周后用水迷宮觀察了大鼠學(xué)習(xí)記憶的變化［7～9］。在水迷宮實(shí)驗(yàn)中，隨著學(xué)習(xí)次數(shù)的增加，各組大鼠逃避潛伏期和游泳距離逐漸縮短，說明各組大鼠在4 d游泳訓(xùn)練中對(duì)于尋找平臺(tái)均有一定的學(xué)習(xí)記憶能力。但是，不同組之間改變顯著不同，表現(xiàn)了大鼠不同的學(xué)習(xí)記憶能力。模型組在水中游泳尋找平臺(tái)的潛伏期明顯高于正常組和空白組；隨著訓(xùn)練時(shí)間的延長(zhǎng)，模型組大鼠找到平臺(tái)的時(shí)間逐漸縮短，縮短的幅度較正常組和空白組均小。在平臺(tái)的停留位置亦少于正常組和空白組。對(duì)大鼠在尋找平臺(tái)過程中表現(xiàn)出的不同方式比較發(fā)現(xiàn)，正常組大鼠往往采取直接游向平臺(tái)，或者根據(jù)水池壁標(biāo)志尋找平臺(tái)的方式較快地找到平臺(tái)，表明這些大鼠對(duì)環(huán)境的記憶已經(jīng)非常深刻，空間定向能力好，而模型組大鼠進(jìn)入水池后無目的地游動(dòng)，經(jīng)常找不到平臺(tái)。從大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)、空間搜索實(shí)驗(yàn)、跨越原平臺(tái)位置次數(shù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，該模型具有認(rèn)知功能障礙。通過補(bǔ)腎化痰法和哈伯因干預(yù)，補(bǔ)腎化痰法高、中、低量組和西藥組較模型組大鼠逃避潛伏期縮短，跨越原平臺(tái)次數(shù)增加，表明補(bǔ)腎化痰法對(duì)AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙有改善作用。

AD屬中醫(yī)學(xué)的呆病、郁證、文癡等范疇，以本虛標(biāo)實(shí)為主要特征，本虛在于腎的精氣不足，標(biāo)實(shí)在于痰濁，一方面腎虛為主的臟腑功能失調(diào)可導(dǎo)致痰濁的產(chǎn)生，即因虛致實(shí)，另一方面，痰濁為患又可影響氣血津液的化生和運(yùn)行，致本虛更甚，即因?qū)嵍绿?，兩者互為因果，形成惡性循環(huán)，以致病程纏綿，見癥多端，所以本病以補(bǔ)腎化痰為基本治法［10，11］。

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第4篇：動(dòng)物行為學(xué)的意義范文

關(guān)鍵詞：頤腦解郁方；抑郁；行為；免疫組化；5－羥色胺；去甲腎上腺素

中圈分類號(hào)：R－33　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A　文章編號(hào)：1673－7717(2008)07－1446－03

抑郁癥(Depression)是指以顯著而持久的情緒低落、活動(dòng)能力減退、思維與認(rèn)知功能遲緩為臨床主要特征的一類心境障礙。其發(fā)病率、傷殘率、復(fù)發(fā)率均較高，嚴(yán)重危害人們的心身健康。WHO指出，21世紀(jì)人類面對(duì)的最大疾息是精神疾病，而抑郁癥是其中的重點(diǎn)。對(duì)抑郁癥的研究已引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視。目前西藥對(duì)抑郁癥的治療仍存在著起效慢、療程長(zhǎng)、副作用大、藥價(jià)昂貴、部分患者對(duì)抗抑郁劑治療無效等不盡人意之處。近年來根據(jù)中醫(yī)辨證論治的原則，對(duì)癥用藥，具有一定的優(yōu)勢(shì)。因此從中醫(yī)藥的角度對(duì)抑郁癥的病因病機(jī)、治則治法進(jìn)行理論性總結(jié)和探討，并結(jié)合療效確切的中藥復(fù)方對(duì)中醫(yī)藥治療抑郁癥進(jìn)行藥效學(xué)觀察和機(jī)理方面的探討，具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。本研究采用行為學(xué)及免疫組織化學(xué)方法，探討了頤腦解郁方對(duì)抑郁狀態(tài)模型大鼠行為學(xué)及腦內(nèi)5－羥色胺、去甲腎上腺素的影響。

1　材料與方法

1．1　動(dòng)物及分組

二級(jí)雄性Wistar大鼠，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證編號(hào)：SCXK(京)2002－0003。飼養(yǎng)1周(早7：00－19：00光照，19：00－次日7：00黑暗)，體重達(dá)250－300g，用OPEN－FIELD法進(jìn)行行為評(píng)分…，選擇評(píng)分相近的大鼠，隨機(jī)分為正常組、模型組、治療組、對(duì)照組，每組10只。

1．2　造模方法

正常組：每籠5只飼養(yǎng)，正常飲食飲水。模型組：參照文獻(xiàn)，采用慢性應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)法，每籠1只飼養(yǎng)，進(jìn)行為期21天的慢性不可預(yù)見的應(yīng)激，造成大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型。治療組：參照文獻(xiàn)建立慢性應(yīng)激抑郁狀態(tài)大鼠模型，造模結(jié)束后開始灌胃給藥，每日1次，連續(xù)6周。對(duì)照組：參照文獻(xiàn)建立慢性應(yīng)激抑郁狀態(tài)大鼠模型，造模結(jié)束后開始灌服生理鹽水，每日1次，連續(xù)6周。以上各組動(dòng)物在相互隔離的環(huán)境下飼養(yǎng)。

1．3　藥物

頤腦解郁方(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定)，使用前按照灌胃劑量煎藥濃縮，濃度0.62g生藥/mL，貯存于4℃冰箱中備用，臨用前加熱。

1．4　實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

大鼠行為觀察曠野箱(自制)；SMG－2型大鼠水迷宮反應(yīng)箱，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所；Polyvar萬能顯微鏡，美國(guó)；Leitz石蠟切片機(jī)，德國(guó)；CMIAS8真彩病理圖像分析系統(tǒng)，北京航空航天大學(xué)。

免疫組化染色試劑盒，濃縮型DAB試劑盒，兔抗5－HT，北京中山生物技術(shù)有限公司。兔抗NE，Serologicals公司。

1．5　動(dòng)物處理及切片處理

中藥灌胃6周后，進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試(蔗糖水試驗(yàn)，曠野試驗(yàn)，迷宮法試驗(yàn))。然后予100g/L水合氯醛(400111g/kg)麻醉，取腦，用100mL/L的中性甲醛溶液固定。石蠟包埋，Leitz石蠟切片機(jī)進(jìn)行石蠟切片，片厚6um。

1．6　免疫組織化學(xué)染色(ABC法)

采用ABC法，主要步驟如下：切片入10mL/L甲醇H2O2液，室溫30min。蛋白酶K消化，37℃30min。正常羊血清，室溫30min。兔抗5－HT(1：80)，兔抗NE(1：300)，4℃過夜。生物素化二抗工作液，37℃2h。辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃2h。0.05％DAB－0.01％H2O2液顯色。脫水，透明，封片。

1．7　圖像分析與統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

每組隨機(jī)取3張片子，每張片子在大腦額葉皮質(zhì)及海馬CA1－CA4區(qū)各取3個(gè)視野，采用CMIAS8真彩病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)5－HT、NE陽性細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量分析，統(tǒng)計(jì)每個(gè)場(chǎng)的面密度。

1．8　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS for windows 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以平均差±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間差異采用單因素方差分析(ANOVA)。

2　結(jié)果

2．1　頤腦解郁方對(duì)模型大鼠行為學(xué)的影響

蔗糖水試驗(yàn)中，模型組、治療組、對(duì)照組大鼠在治療前蔗糖水?dāng)z入量與正常組相比，均明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。治療組大鼠治療后蔗糖水?dāng)z入量明顯增加，與對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

曠野試驗(yàn)中對(duì)照組、模型組大鼠水平及垂直得分均小于正常組，有顯著性差異(P＜0.01)。反映了對(duì)照組和模型組大鼠活動(dòng)性減少，興趣缺乏。治療組大鼠水平走格數(shù)與站立次數(shù)明顯增加，水平得分和垂直得分均高于對(duì)照組，與對(duì)照組相比，有顯著差異(P＜0.01)。見表2。

水迷宮法試驗(yàn)中，模型組、對(duì)照組大鼠游到終點(diǎn)的時(shí)間延長(zhǎng)，錯(cuò)誤次數(shù)增加，與正常組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或0.01)，反映模型組、對(duì)照組大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力下降。治療組大鼠游出時(shí)間明顯縮短，錯(cuò)入盲端次數(shù)減少，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或0.01)。見表3、表4。

2．2　頤腦解郁方對(duì)模型大鼠腦額葉皮質(zhì)及海馬5－HT的影響

正常組大鼠腦皮質(zhì)內(nèi)可見I－Ⅵ層均有5－HT陽性細(xì)胞，形態(tài)、大小規(guī)則，細(xì)胞層次清晰，5－HT表達(dá)在細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈深棕色，核區(qū)呈陰性，海馬CA1－CA4區(qū)錐體細(xì)胞層均表達(dá)5－HT，大多呈錐體形。模型組大鼠腦額葉皮質(zhì)和海馬錐體細(xì)胞層的5－HT陽性細(xì)胞數(shù)量也明顯減少，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，間隙增大，排列疏松不齊，表達(dá)明顯減弱。對(duì)照組大鼠皮質(zhì)和海馬錐體細(xì)胞層5－HT的表達(dá)明顯減弱。治療組大鼠皮質(zhì)Ⅱ－V層及海馬錐體細(xì)胞層均有5－HT的表達(dá)，且與對(duì)照組相比，5－HT的表達(dá)明顯增強(qiáng)，陽性細(xì)胞數(shù)量也明顯增多。結(jié)果表明頤腦解郁方能促進(jìn)抑郁模型大鼠腦皮質(zhì)、海馬5－HT的表達(dá)。見表5。

2．3　頤腦解郁方對(duì)模型大鼠腦額葉皮質(zhì)及海馬NE的影響

正常組大鼠腦皮質(zhì)內(nèi)可見I－Ⅵ層均有NE陽性細(xì)胞，但主要集中在Ⅱ－Ⅵ層，NE表達(dá)在細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈深棕色，核區(qū)呈陰性，同時(shí)血管壁也有表達(dá)。模型組大鼠

腦皮質(zhì)及海馬NE的表達(dá)與正常組相比，出現(xiàn)陽性細(xì)胞表達(dá)減弱。對(duì)照組大鼠腦皮質(zhì)及海馬NE表達(dá)明顯減弱。NE陽性細(xì)胞數(shù)量也明顯減少且顏色變淺。治療組大鼠大腦額葉皮質(zhì)NE表達(dá)在Ⅱ－V層，且與對(duì)照組大鼠比較，NE的表達(dá)明顯增強(qiáng)，陽性細(xì)胞數(shù)量也明顯增多，顏色明顯加深。說明頤腦解郁方能夠促進(jìn)抑郁模型大鼠皮層及海馬NE的表達(dá)。見表6。

3　討論

中樞5－HT能和NE能系統(tǒng)與情感活動(dòng)關(guān)系密切。目前研究認(rèn)為，腦內(nèi)去甲腎上腺素能系統(tǒng)調(diào)節(jié)睡眠和覺醒、學(xué)習(xí)和記憶、選擇性注意、應(yīng)激反應(yīng)以及獎(jiǎng)賞系統(tǒng)的功能。5－羥色胺在中樞具有調(diào)節(jié)情感、睡眠、警覺、記憶、食欲、等多種功能，可以增加行為活動(dòng)和自發(fā)學(xué)習(xí)積極性。腦內(nèi)去甲腎上腺素(NE)和5－羥色胺(5－HT)之間的平衡失調(diào)，即5－HT和(或)NE一種或數(shù)種神經(jīng)遞質(zhì)(生物胺)出現(xiàn)了神經(jīng)生化上的失衡或功能缺陷，導(dǎo)致傳遞功能受損，從而引起抑郁。

Papes(1937)提出了大腦的情緒回路，認(rèn)為大腦皮質(zhì)、海馬是調(diào)節(jié)情緒功能的兩個(gè)主要區(qū)域。Starkstein等和Robinson等認(rèn)為，腦卒中后抑郁是病灶破壞了NE能神經(jīng)元和5－HT能神經(jīng)元及其徑路，使這2種遞質(zhì)低下而導(dǎo)致抑郁狀態(tài)的發(fā)生。因?yàn)镹E能和5－HT能神經(jīng)元胞于腦干，其軸突通過丘腦及基底神經(jīng)節(jié)投射到達(dá)額葉皮質(zhì)及邊緣系統(tǒng)。5－HT神經(jīng)元的密集處中縫核群和去甲腎上腺素神經(jīng)元的密集處藍(lán)斑核之間有豐富的神經(jīng)聯(lián)系。目前研究認(rèn)為，腦內(nèi)去甲腎上腺素能系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)睡眠和覺醒、學(xué)習(xí)和記憶、選擇性注意、應(yīng)激反應(yīng)以及獎(jiǎng)賞系統(tǒng)的功能。5－羥色胺在中樞具有調(diào)節(jié)情感、睡眠、警覺、記憶、食欲、等多種功能，可以增加行為活動(dòng)和自發(fā)學(xué)習(xí)積極性。PSD的發(fā)生可能與大腦損害引起NE和5－HT之間的平衡失調(diào)有關(guān)。病灶累及上述部位時(shí)，就有可能影響區(qū)域內(nèi)的去甲腎上腺素能和5－羥色胺能的神經(jīng)通路，使去甲腎上腺素和5－羥色胺含量下降，從而導(dǎo)致抑郁。

第5篇：動(dòng)物行為學(xué)的意義范文

【摘要】 ［目的］探討電針對(duì)SD大鼠的行為學(xué)的影響。［方法］健康SD大鼠30只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（簡(jiǎn)稱正常組）10只，模型對(duì)照組（簡(jiǎn)稱模型組）10只，電針加模型組（簡(jiǎn)稱電 針組）10只三組；正常組采用大平臺(tái)法造模；模型組采用小平臺(tái)法造模，電針組造模同模型組，給予每日1次的電針治療。采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法，觀察針灸的抗睡眠剝奪作用。［結(jié)果］電針能明顯改變其行為學(xué)指標(biāo)。［結(jié)論］電針可以改善其行為學(xué)，這種作用可能與電針促進(jìn)神經(jīng)內(nèi)分泌免疫學(xué)機(jī)制有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 電針；大鼠睡眠剝奪（SD）；行為學(xué)；百會(huì)；三陰交

Abstract： ［Objective］ To investigate the effects of REMl sleep deprivation （SD） on actions to investigate the efficacy of application of electroacupuncture for treating sleep deprivation.［Methods］Thirty healthy SD rats randomly allocated to three groups （normal control，model （A1），electrotreatment groups）.The rats of model （A1）group and electrotreatment group were induced in male rats by housing them on small platforms overwater，normalcontrol group rats were on big platforms overwater.After electrotreatment for electrotreatment groups，the changes of normal status and Open Field Test were measured with all rats.［Results］Electroacupuncture treatment can improve the actions.［Conclusion］Application of electroacupuncture can produce a fighting effect on sleep deprivation.The effect may be related to promoting the nerval endocrine cytokine of electroacupuncture.

Key words：electroacupuncture; rats sleep deprivation; actions;Baihui; San yinjiao

睡眠剝奪（sleep deprivation，SD）是指由于某些原因?qū)е碌乃杷邤?shù)量被迫減少［1］。本研究通過觀察針刺對(duì)睡眠剝奪大鼠行為學(xué)的影響。探索針刺改善失眠等睡眠障礙患者臨床癥狀的作用機(jī)理。

1 SD大鼠模型的建立

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康SpragueDawley（SD）大鼠30只，雌、雄各半，體重200～250g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境溫度：（20±2）℃；濕度：60％～80％；水溫：保持在20℃左右。

1.2 主要儀器設(shè)備

小平臺(tái)（20個(gè)）：根據(jù)文獻(xiàn)［2］制成30cm×30cm×40cm鼠箱，睡眠剝奪裝置為圓柱形，正中立一直徑6cm，高8cm的小平臺(tái)，從箱底注水，使水面離平臺(tái)約1cm。每天早晚8：30更換鼠箱中的水。上午8∶00～11∶00之間在安靜的房間內(nèi)進(jìn)行觀察記錄。將大鼠置于中心方格內(nèi)，記錄大鼠在3min曠場(chǎng)內(nèi)的活動(dòng)，徹底清潔敞箱后再進(jìn)行下1只大鼠的觀察。

1.3 動(dòng)物造模

采用小平臺(tái)水環(huán)境法，剝奪箱為30cm×30cm×40cm大小的塑料水箱，正中立一直徑6cm圓形平臺(tái)，箱中注滿水，水面距平臺(tái)面約1.0cm。大鼠在平臺(tái)上可自由進(jìn)食進(jìn)水，如果睡眠，會(huì)因?yàn)榧埩λ沙诙淙胨?，因而造成SD。為排除隔離、限制活動(dòng)和水環(huán)境造成的應(yīng)激影響，我們采用了大平臺(tái)水環(huán)境法，其平臺(tái)直徑為18.0cm，大鼠在平臺(tái)上可以睡眠，其他環(huán)境與小平臺(tái)水環(huán)境法相同。SD期間持續(xù)燈光照射，室內(nèi)溫度控制在18℃～22℃。每天更換箱中的水，水溫保持在20℃左右。正常組（大平臺(tái)組）單獨(dú)籠養(yǎng)，自然晝夜光照，電針組條件同睡眠剝奪組，共持續(xù)9d。結(jié)果:健康SpragueDawley（SD）大鼠30只，成功造模28只，實(shí)驗(yàn)大鼠在造模過程中死亡兩只。其中正常組9只，電針組10只，模型組9只。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組及處理

SD動(dòng)物模型成功28只，按照隨機(jī)分組的原則，分為正常組（即大平臺(tái)組）、電針組、模型組。

正常對(duì)照組（簡(jiǎn)稱正常組）：9只，采用大平臺(tái)，大鼠在已注水平臺(tái)上可以自由進(jìn)食飲水和睡眠；并在電針組治療時(shí)，用與電針組相同方法進(jìn)行抓放、固定，但不針刺。試驗(yàn)期間持續(xù)燈光照射，室溫（20±2）℃。

模型對(duì)照組（簡(jiǎn)稱模型組）：10只，采用小平臺(tái)水環(huán)境法。將大鼠放于已注水的小平臺(tái)上，大鼠在平臺(tái)上可自由進(jìn)食飲水，如果睡眠，會(huì)因?yàn)榧埩λ沙诙淙胨?。余同正常組。

電針加模型組（簡(jiǎn)稱電針組）：9只，從試驗(yàn)第2天開始，于每天上午9∶00針刺針灸組大鼠“百會(huì)”、“三陰交”，選用1寸30號(hào)毫針，電針，留針20min。穴位定位：根據(jù)李忠仁編著的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位定位。電針治療儀：采用G6805I型電針儀（青島生產(chǎn)）;電針刺激參數(shù)：頻率100HZ；電壓24V；波形：疏密波；強(qiáng)度：以大鼠能安靜耐受為度，約為2mA； 療程：1次/d，共治療9d。余同模型組。

2 電針SD大鼠一般狀況的影響

模型組與電針組在早期均表現(xiàn)為興奮性增高，易激惹，對(duì)外界的反應(yīng)性及攻擊性增強(qiáng)，但72h后，可見身體明顯消瘦、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、警覺力下降等現(xiàn)象。而電針組在72h后大鼠并無身體明顯消瘦、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、警覺力下降等現(xiàn)象。正常組全程全部精神活潑、穩(wěn)定；活動(dòng)如常；抓取時(shí)反抗較劇，咬人；自48h起全部對(duì)照動(dòng)物耳廓、雙目和四肢末顏色呈淡粉紅色；144～216h，本組鼠毛由正常變?yōu)槁钥蓍?、潮濕?/p>

3 電針對(duì)SD大鼠的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的影響

3.1 指標(biāo)檢測(cè)方法

各組動(dòng)物每天按組處理，并于處理后30min放入曠場(chǎng)中，測(cè)試其水平得分、垂直得分和中央格停留時(shí)間。曠場(chǎng)箱為木質(zhì)箱，底面為12m 的正方形，劃為25個(gè)面積相等的小方格，箱高40cm，周壁涂成黑色。測(cè)試時(shí)，將大鼠置于曠場(chǎng)測(cè)試箱底面中心，觀察其3min內(nèi)的行為。觀察指標(biāo)：以大鼠在中央格（即不靠近周壁的9個(gè)格子）停留的時(shí)間為中央格停留時(shí)間（time of staying in center），以大鼠穿越底面的方格數(shù)為水平得分（crossing core ），以后肢站立的次數(shù)為垂直得分（rearing core）。記錄各組動(dòng)物每天的垂直活動(dòng)得分、水平活動(dòng)得分和中央格內(nèi)停留時(shí)間。并觀察動(dòng)物修飾行為和大小便次數(shù)。每只動(dòng)物僅做一次行為測(cè)定，每次試驗(yàn)后，清洗曠場(chǎng)周壁及底面，以免上次動(dòng)物余留的信息影響下次測(cè)試結(jié)果。

3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、2及圖2～4。 表 1 不同時(shí)間大鼠在曠場(chǎng)反應(yīng)中的水平得分（s）（略）表2 不同時(shí)間大鼠在曠場(chǎng)反應(yīng)中的水平得分（s）（略）

圖1及表1、2所示：正常組與電針組相比較，水平得分比較無意義，P=0.507（P>0.05）；正常組與模型組比較有極顯著差異，P=0.001（P

圖2及表3、4所示：正常組與電針組相比較，垂直得分比較無意義，P=0.681（P>0.05）；正常組與模型組比較有極顯著差異，P=0.002（P

從圖3、表5及表6可知，正常組與模型組比較有極顯著差異（P

4 討論

4.1 關(guān)于SD動(dòng)物模型的選擇

睡眠剝奪動(dòng)物模型是引起失眠較理想的研究睡眠的手段。本研究采用小平臺(tái)水環(huán)境法進(jìn)行SD表明：平臺(tái)面積與大鼠體重量之比為1∶1時(shí)不會(huì)產(chǎn)生SD，故本研究中大平臺(tái)直徑為18.0cm，在實(shí)驗(yàn)前后大平臺(tái)組體重?zé)o明顯變化，說明其應(yīng)激水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于SD組。水環(huán)境和隔離對(duì)動(dòng)物確實(shí)產(chǎn)生一定的應(yīng)激作用，這從曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)得分可知。由曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)得知，與正常組相比，大鼠SD后精神行為表現(xiàn)出一定的興奮性，修飾行為或“洗臉”行為增多。我們知道修飾行為常發(fā)生于產(chǎn)生矛盾或害怕的情境中［3］，說明SD環(huán)境使大鼠情緒非常緊張恐懼，攻擊行為增多。SD時(shí)間短，表現(xiàn)為一定的興奮，72h以后則有抑制趨勢(shì)。正常組由于一定的應(yīng)激作用，興奮性較高，并且沒有SD的影響，所以曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)得分優(yōu)于其他各組。由于大鼠SD后興奮性的提高，隨著SD時(shí)間的延長(zhǎng)，剝奪程度加深。

4.2 電針對(duì)SD大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的影響

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（Open Field Test）是目前最常用的一種動(dòng)物心理實(shí)驗(yàn)方法，用來研究新環(huán)境中自發(fā)活動(dòng)（Spontaneous Activity）和探究行為（Explore behavior），檢驗(yàn)受試動(dòng)物在新環(huán)境下探究行為和適應(yīng)性。

從測(cè)試結(jié)果可知，正常組動(dòng)物的水平得分及垂直得分呈下降趨勢(shì)，表明動(dòng)物活動(dòng)性下降。實(shí)驗(yàn)中觀察到，正常組動(dòng)物生活相對(duì)安逸，又因?yàn)闀鐖?chǎng)測(cè)試在白天進(jìn)行，正是大鼠的相對(duì)安靜時(shí)間，故而動(dòng)物不愛活動(dòng)；實(shí)驗(yàn)的后期尤其如此；這可能也同其對(duì)曠場(chǎng)環(huán)境的逐步熟悉有關(guān)［4］。但與此同時(shí)，正常組動(dòng)物表現(xiàn)機(jī)敏、反應(yīng)靈活、目光有神、空間識(shí)別能力強(qiáng)。模型組動(dòng)物卻不如此，水平得分及垂直得分均有很大的波動(dòng)，在SD192h時(shí)仍相當(dāng)高，在最后一次測(cè)試時(shí)仍在增加。此時(shí)動(dòng)物極為疲憊，體力己衰弱而殆盡，行走時(shí)表現(xiàn)方向感極差。與此同時(shí)，電針組動(dòng)物則表現(xiàn)較為穩(wěn)定，波動(dòng)比較小。

中央格停留時(shí)間反映動(dòng)物對(duì)環(huán)境的認(rèn)知能力。正常動(dòng)物會(huì)避開空曠環(huán)境，迅速離開中央格，沿周邊活動(dòng)。如果對(duì)新環(huán)境的認(rèn)知能力差，則停留在中央格的時(shí)間就會(huì)延長(zhǎng)。從我們的測(cè)試結(jié)果來看，正常組大鼠在中央格的停留時(shí)間日益減少；事實(shí)上，這組動(dòng)物在放入曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱后通常會(huì)迅速離開中央地帶，行至角落或箱壁下，整理毛發(fā)，偶爾站立，少有行走。模型組動(dòng)物經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間SD，對(duì)環(huán)境的認(rèn)知能力明顯下降，常反復(fù)穿越中央地帶并在其中逗留，呆在中央格中的時(shí)間不斷增長(zhǎng)。電針組動(dòng)物的中央格停留時(shí)間則有不同程度的下降，提示電針可以改善睡眠剝奪大鼠的空間認(rèn)知能力。

此外，曠場(chǎng)行為測(cè)試指標(biāo)還包括理毛時(shí)間（修飾時(shí)間）和排便次數(shù)。理毛是動(dòng)物滿足的表現(xiàn)；排便多則反映了動(dòng)物的緊張程度高。由于我們采用改良多平臺(tái)水環(huán)境法造模，接受SD的動(dòng)物常常水濕毛發(fā)，放入曠場(chǎng)中時(shí)欲將其毛發(fā)舔干而使理毛時(shí)間增加，從而對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾。本實(shí)驗(yàn)中，接受SD的動(dòng)物雖然與正常動(dòng)物有同樣的進(jìn)食進(jìn)水機(jī)會(huì)，但由于中樞、軀體雙重應(yīng)激的影響，食欲明顯下降，尤其是實(shí)驗(yàn)后期，進(jìn)食顯著減少，因此，排便次數(shù)作為考察指標(biāo)的準(zhǔn)確性特異性也不強(qiáng)。故而我們沒有將這兩項(xiàng)作為考察藥物作用效果的指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

［1］Drummond SP，Brown GG.The effects of total sleep deprivation on cerebral Responses to cognitive performance［J］.Neuropsychopharmacology，2001，25（5）：68.

［2］Mendelson W.B，Guthrie R.D，et al.The flowerpot technique of rapid eye movement sleep deprivation［J］.Pharmacol Behave，1974，2：553556.

第6篇：動(dòng)物行為學(xué)的意義范文

[關(guān)鍵詞] 異氟醚；Y-迷宮；老年大鼠；RhoGTPases；RhoA

[中圖分類號(hào)] R332 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）06（a）-0038-04

Affect of Isoflurane on spatial memory function and hippocampal RhoA expression in aged rats

ZHANG Wenchao1 WANG Geng1 HU Zhonghua2 DUAN Kaiming2 OUYANG Wen2

1.Department of Anesthesiology， Beijing Jishuitan Hospital， Beijing 100035， China； 2.Department of Anesthesiology， the Third Xiangya Hospital of Central South University， Hu'nan Province， Changsha 410083， China

[Abstract] Objective To study affect of Isoflurane with inhalation anesthesia on hippocampal RhoA expression and spatial memory function in aged rats. Methods Thirty 22-month-old Sprague-Dawley rats were randomly assigned to control group （group C， 10 cases）， anesthesia group Ⅰ （10 cases） and anesthesia group Ⅱ （10 cases）. The inhalation anesthesia model of aged rat was established by using endotracheal intubation， 2% Isoflurane was applied to maintain anesthesia of 2 hours after anesthesia induction with 3% Isoflurane by inhalation in anesthesia groups. Any drug was not used in rat of group C， which inhaled 100% oxygen for 2 hours， oxygen flow rate was 2 L/min. Open-field experiment and Y-maze experiment were implemented， performance was calculated after anesthesia of 24， 72 hours in group Ⅰ and group Ⅱ. Learning and memory ability in rats of three groups were compared. Hippocampal RhoA expression in rats of three groups were detected by using the immune histochemical method. Results ①Y-maze experiment： Y-maze learning time of group Ⅰ [（70.50±16.25） times] was significantly more than that of group Ⅱ [（61.80±23.49） times] and group C [（49.20±8.56） times] respectively （P < 0.05）. Y-maze learning time of group C and group Ⅱ was compared， with no statistical difference （P > 0.05）. Open-field experiment： there were no statistical difference on the middle of residence time， number of upright， number of across grid， number of total activity among three groups （P > 0.05）. ②Immune histochemical method： RhoA positive cell count of hippocampal CA3 area in group Ⅰ （112.66±11.56） was more than that in group Ⅱ （97.77±7.47） and group C （99.33±12.10） respectively （P < 0.05）. RhoA positive cell count of hippocampal CA3 area in group Ⅱ and group C was compared， with no statistical difference （P > 0.05）. Conclusion Spatial learning and memory ability of 22-month Sprague-Dawley rats received Isoflurane anesthesia of 24 hours decline， basic recovery after anesthesia of 72 hours. The hippocampus of rat after Isoflurane anesthesia Rho protein signal transduction molecular change mediated synaptic morphology change may be the cellular basis of short-term spatial learning and memory damage.

[Key words] Isoflurane； Y-maze； Aged rat； RhoGTPases； RhoA

近年來，許多研究從大腦海馬區(qū)神經(jīng)突觸形態(tài)學(xué)的變化來探究神經(jīng)結(jié)構(gòu)對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能的影響。異氟醚對(duì)神經(jīng)軸突與樹突結(jié)構(gòu)有很大的可塑性，而這種可塑性的變化可能是學(xué)習(xí)與記憶能力的細(xì)胞基礎(chǔ)[1]。Rho蛋白家族是與受體偶聯(lián)的小G蛋白家族，分子量為20～30 kD，屬于Ras超家族成員，在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要的功能[2]。其主要成員RhoA蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架的聚合，對(duì)神經(jīng)纖維延長(zhǎng)與塌陷、神經(jīng)生長(zhǎng)方向具有導(dǎo)向作用，通過對(duì)肌動(dòng)蛋白的調(diào)控而起調(diào)控樹突狀偽足和樹突棘形態(tài)的動(dòng)態(tài)變化，影響神經(jīng)可塑性，而這一現(xiàn)象在學(xué)習(xí)基本形式的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)（LTP）中有充分的體現(xiàn)[3]。本研究以老齡SD大鼠作為研究對(duì)象，通過建立吸入麻醉模型，使用動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察異氟醚麻醉后老年大鼠興奮性、探索性指標(biāo)以及空間辨別能力的變化，通過免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠海馬區(qū)RhoA蛋白的表達(dá)變化，為探討22月齡大鼠短時(shí)間異氟醚麻醉后興奮性、空間辨別能力改變的的機(jī)制提供理論依據(jù)，從而更好地闡明吸入異氟醚后對(duì)認(rèn)知功能障礙的發(fā)病機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組

22月齡老齡SD大鼠，訂購(gòu)于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)（生產(chǎn)許可證SCXK湘2006-0001）體重550～620 g。飼養(yǎng)條件為（22±1）℃，相對(duì)濕度40%～50%，自然晝夜非直接光照。經(jīng)穿梭箱回避實(shí)驗(yàn)篩選出30只學(xué)習(xí)記憶能力正常的大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組C組（n = 10）、麻醉后24 h Ⅰ組（n = 10）和麻醉后72 h Ⅱ組（n = 10）。

1.2 模型建立

采用Deatex-Ohmeda氣體監(jiān)測(cè)儀監(jiān)測(cè)自制麻醉箱中異氟醚濃度。待麻醉箱內(nèi)異氟醚濃度調(diào)節(jié)至3%時(shí)將麻醉組大鼠放于麻醉箱內(nèi)5 min，再將處于誘導(dǎo)狀態(tài)的老年大鼠，置于自制拱形氣管插管臺(tái)上，采用經(jīng)口明視氣管插管方法，將14G靜脈套管經(jīng)鋼絲引導(dǎo)插入老鼠氣管中[4]。PetCO2探頭確定氣管插管操作成功后，將氣管導(dǎo)管與麻醉機(jī)相連，大鼠自主吸入麻醉氣體，異氟醚濃度調(diào)為2%。應(yīng)用鼠尾無創(chuàng)血壓檢測(cè)儀與分析系統(tǒng)（北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司）于麻醉誘導(dǎo)前，麻醉誘導(dǎo)過程中，麻醉維持2 h與蘇醒后分別檢測(cè)大鼠鼠尾無創(chuàng)收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓（MAP）、心率（HR）。麻醉結(jié)束后，大鼠在吸入純氧下自然蘇醒。

1.3 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 Y-迷宮實(shí)驗(yàn)

根據(jù)文獻(xiàn)[5]，將大鼠放入Y-迷宮箱中適應(yīng)3～5 min，然后隨機(jī)開始實(shí)驗(yàn)：隨機(jī)變換電擊區(qū)和安全區(qū)，觀察動(dòng)物學(xué)會(huì)逃離電擊區(qū)而進(jìn)入安全區(qū)的反應(yīng)能力。大鼠進(jìn)入安全區(qū)后，燈光繼續(xù)維持5 s，以便大鼠確認(rèn)安全位置。兩次測(cè)試時(shí)間間隔為30 s，每次訓(xùn)練20次，休息5 min，連續(xù)測(cè)試直到學(xué)會(huì)為止，若測(cè)試次數(shù)100次則不再測(cè)試，并以100為最大計(jì)數(shù)值。每次測(cè)試后，清理Y-迷宮箱，以免動(dòng)物氣味對(duì)下次測(cè)試結(jié)果造成影響[6]。

1.3.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

參照文獻(xiàn)[7-8]采用自制曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察箱100 cm×100 cm×50 cm（長(zhǎng)×寬×高），箱底分為25個(gè)方格（20 cm×20 cm），墻壁涂黑。將曠場(chǎng)分析箱從左上開始，按左到右順序以不同編號(hào)為相同的25個(gè)小格，其中7、8、9、12、13、14、17、18和19為中央?yún)^(qū)域，其余為外周格，13號(hào)為中央格子。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)捏住大鼠尾巴距根部2/3處輕放入中央格中，觀察大鼠5 min內(nèi)活動(dòng)情況，每次測(cè)定結(jié)束將動(dòng)物排泄物清除干凈，每只僅測(cè)定1次。實(shí)驗(yàn)時(shí)間結(jié)束錄像分析結(jié)果。設(shè)兩位觀察者分別觀察記錄不同指標(biāo)。以跨格次數(shù)為水平活動(dòng)得分，直立次數(shù)為垂直活動(dòng)得分，記錄中央格停留時(shí)間。

1.4 標(biāo)本制備

行為學(xué)測(cè)試后，用麻醉致死法對(duì)大鼠腹腔注射，在大鼠心臟還在跳動(dòng)時(shí)通過左心耳快速灌注4℃生理鹽水100 mL洗凈血液，然后以4%多聚甲醛200～300 mL灌注固定。止血鉗剝離大鼠顱骨，取出完整大腦置于4℃ 4%多聚甲醛中浸泡6 h，而后移入4℃的30%蔗糖溶液，將大腦冰凍切片（片厚為30 μm），用pH 7.4的0.01% PBS切片，接著進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。

免疫組織化學(xué)染色：切片移入0.1Triton～0.001% H2O2溶液中，在37℃下反應(yīng)30 min，PBS緩沖液漂洗后，以3%正常羊血清封閉30 min，然后加兔抗RhoA抗體，4℃溫盒內(nèi)孵育72 h。漂洗后加入即用型二抗（上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司），37℃孵育30 min，PBS沖洗，0.05% DAB～0.01% H2O2溶液顯色，脫水，封片。應(yīng)用彩色病理圖片分析系統(tǒng)，對(duì)所有切片在同一光度下，每張切片隨機(jī)選取3個(gè)200倍鏡下視野計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞，以單個(gè)標(biāo)本為單位，取平均值。

1.5 RhoA分析

參照大鼠腦圖譜，每只大鼠選含背側(cè)海馬相應(yīng)斷面，選擇其中顯色較好且非特異性背景染色控制良好的切片3張。在光鏡下從每張切片的海馬CA3區(qū)有代表性區(qū)域分別隨機(jī)選擇3個(gè)高倍視野（10×40倍），統(tǒng)計(jì)各視野RhoA陽性細(xì)胞數(shù)。陽性標(biāo)準(zhǔn)：棕黃色顆粒，特異性分布于胞質(zhì)與胞核。染色深度達(dá)到足以區(qū)分細(xì)胞周界的神經(jīng)元被計(jì)數(shù)，計(jì)算平均值。同時(shí)分別在20倍與400倍鏡下采集圖像，通過圖像分析軟件Image-Pro Plus 6.0對(duì)切片免疫組織化學(xué)陽性染色細(xì)胞進(jìn)行定量分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

三組22月齡大鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。麻醉組老齡SD大鼠中麻醉前后收縮壓、舒張壓、MAP、HR、鼠尾氧飽和度保持在正常范圍，PetCO2維持在36～42 mm Hg（1 mm Hg = 0.133 kPa）且波形規(guī)則，皮膚顏色紅潤(rùn)，未出現(xiàn)血壓較大波動(dòng)及缺氧現(xiàn)象。

2.2 三組大鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：三組大鼠跨格次數(shù)、直立次數(shù)、總活動(dòng)量次數(shù)及中央格停留時(shí)間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P> 0.05）；Y-迷宮實(shí)驗(yàn)：Ⅰ組Y-迷宮學(xué)習(xí)次數(shù)明顯多于Ⅱ組和C組（P < 0.05），而Ⅱ組與C組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

表1 三組大鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較（x±s）

注：與Ⅰ組比較，*P < 0.05

2.3 三組大鼠免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果

光鏡下免疫組織化學(xué)結(jié)構(gòu)顯示：大鼠海馬組織中可見RhoA主要分布于椎體細(xì)胞層和輻射層，陽性細(xì)胞呈棕褐色，染色均勻，排列規(guī)則，呈弧形分布。200倍鏡下隨機(jī)選取3個(gè)視野大鼠海馬區(qū)RhoA陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)，Ⅰ組RhoA陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)多于Ⅱ組和C組（P < 0.05），Ⅱ組與C組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），表明在異氟醚吸入麻醉后24 h，大鼠海馬區(qū)RhoA表達(dá)增加，吸入麻醉后72 h有所恢復(fù)。見表2。

表2 三組大鼠海馬CA3區(qū)RhoA陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

注：與Ⅰ組比較，*P < 0.05

3 討論

術(shù)后認(rèn)知功能障礙（postoperative cognitive dysfunction，POCD）是指麻醉術(shù)后老年患者性格改變、學(xué)習(xí)記憶能力下降等中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙[9-11]。作為老年患者術(shù)后常見并發(fā)癥給患者術(shù)后生活帶來嚴(yán)重?zé)?，?dǎo)致患者喪失社會(huì)活動(dòng)、工作學(xué)習(xí)以及生活自理能力，因此減少麻醉術(shù)后認(rèn)知障礙發(fā)生具有非常重要的意義。調(diào)查顯示，盡管醫(yī)療技術(shù)水平有了很大提高，但是對(duì)于POCD發(fā)病機(jī)制以及預(yù)防和治療方法未得到顯著改善。鑒于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和認(rèn)知相關(guān)研究的復(fù)雜性，POCD發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制一直沒有得到圓滿解答。突觸是一個(gè)神經(jīng)元的沖動(dòng)傳到另一個(gè)神經(jīng)元或傳到另一個(gè)細(xì)胞間相互接觸的結(jié)構(gòu)，是神經(jīng)元之間在功能上發(fā)生聯(lián)系的部位，也是信息傳遞的關(guān)鍵部位。神經(jīng)軸突與樹突結(jié)構(gòu)有很大的可塑性，而這種可塑性的變化可能是學(xué)習(xí)與記憶能力的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)[12]。

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，主要采用行為學(xué)實(shí)驗(yàn)研究藥物對(duì)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的影響，人和動(dòng)物的內(nèi)部心理過程很難直觀觀察到，通過客觀的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛠黹g接推測(cè)腦內(nèi)所發(fā)生的過程，從而反映動(dòng)物認(rèn)知能力的水平與變化[13]。目前，國(guó)內(nèi)外多采用建立條件反射方法檢測(cè)動(dòng)物的行為能力和高級(jí)腦功能。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是將一定面積劃分為不同區(qū)域，并以相應(yīng)的格子對(duì)應(yīng)。大鼠在新環(huán)境中是由緊張、興奮、探索再到適應(yīng)的一系列過程，興奮性的老鼠在適應(yīng)的環(huán)境中表現(xiàn)為行動(dòng)活躍，四處走動(dòng)，留下自身的生物氣息，跨格次數(shù)的多少反映其興奮程度?？绺翊螖?shù)的多少與動(dòng)物的行動(dòng)量成正比，跨格次數(shù)多，活動(dòng)的距離也相應(yīng)增加，這些觀察指標(biāo)可以間接地反映動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮或抑制狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)中，三組大鼠中央格停留時(shí)間、跨格次數(shù)、直立次數(shù)、總活動(dòng)量次數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明2%異氟醚麻醉后24、72 h對(duì)大鼠的緊張、興奮、探索等興奮性指標(biāo)沒有顯著變化，因此可以認(rèn)為短時(shí)間吸入異氟醚對(duì)老年大鼠的空間學(xué)習(xí)能力影響不是由于其中樞興奮狀態(tài)的改變而產(chǎn)生的。Y-迷宮用于檢測(cè)大鼠的空間辨別能力，老年大鼠在迷宮中對(duì)電刺激和光刺激出現(xiàn)被動(dòng)的逃避反應(yīng)，經(jīng)過多次訓(xùn)練后大鼠就能學(xué)會(huì)并記住迷宮的安全位置，間接地反映出老年大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力[14]。Y-迷宮達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)的次數(shù)能夠較客觀地表現(xiàn)大鼠的學(xué)習(xí)能力。

多年來，海馬一直被認(rèn)為是參與學(xué)習(xí)記憶的重要腦區(qū)，因海馬是大腦邊緣系統(tǒng)的重要組成部分，參與外界信息中樞傳遞的整合，一直是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域研究的焦點(diǎn)，海馬區(qū)突觸結(jié)構(gòu)與大鼠學(xué)習(xí)記憶能力密切相關(guān)。海馬區(qū)神經(jīng)元在學(xué)習(xí)記憶過程中主要參與學(xué)習(xí)記憶鞏固的早期過程[15-16]，而后期的學(xué)習(xí)記憶過程更多是與其他腦區(qū)有關(guān)[17]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Ⅰ組大鼠達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)所需的訓(xùn)練次數(shù)明顯多于對(duì)照組（C組），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），Ⅱ組與C組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明2%異氟醚麻醉2 h后可導(dǎo)致老年大鼠空間學(xué)習(xí)能力受損，學(xué)習(xí)能力下降，這種現(xiàn)狀在麻醉后第1天表現(xiàn)最為明顯，而第3天基本恢復(fù)，學(xué)習(xí)結(jié)果體現(xiàn)在海馬區(qū)神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu)的變化基礎(chǔ)上，通過免疫組織化學(xué)法可以直觀觀察海馬區(qū)RhoA陽性細(xì)胞的變化與學(xué)習(xí)成績(jī)變化趨勢(shì)相同，因此可以推斷異氟醚麻醉后老年大鼠短期內(nèi)認(rèn)知能力受損與異氟醚麻醉對(duì)海馬CA3區(qū)RhoA表達(dá)的影響干擾了突觸偽足的形成與塌陷有關(guān)。Kaech等[18]為觀察全麻藥物對(duì)突觸的影響，使用熒光顯微鏡實(shí)時(shí)拍攝技術(shù)，觀察樹突棘的形態(tài)變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)液中加入異氟醚后，神經(jīng)細(xì)胞樹突棘活力下降，說明吸入會(huì)影響海馬區(qū)樹突棘的動(dòng)力性和棘突結(jié)構(gòu)的改變。神經(jīng)軸突與樹突應(yīng)對(duì)麻醉刺激有很大的可塑性，而這種形態(tài)學(xué)的變化可能是學(xué)習(xí)與記憶能力改變的細(xì)胞基礎(chǔ)[19-20]。RhoA通過影響肌球蛋白收縮引起軸突生長(zhǎng)錐的回縮及塌陷，RhoA主要通過Rho相關(guān)激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白微絲骨架的聚集，進(jìn)而影響細(xì)胞的極性和形態(tài)，RhoA可使多個(gè)氨基酸位點(diǎn)磷酸化而激活，肌球蛋白磷酸酶結(jié)合亞單位是活化Rho相關(guān)激酶的底物，磷酸化失活后，促使肌動(dòng)蛋白微絲骨架聚合，從而影響細(xì)胞收縮[21]。本實(shí)驗(yàn)通過觀察老年大鼠海馬組織中Rho蛋白家族RhoA表達(dá)變化，試圖從異氟醚對(duì)海馬組織中神經(jīng)突觸間信號(hào)傳導(dǎo)分子變化的角度來闡釋麻醉后學(xué)習(xí)空間能力的改變。實(shí)驗(yàn)中觀察到麻醉后大鼠海馬組織中RhoA表達(dá)增高，麻醉后72 h恢復(fù)正常水平，說明異氟醚吸入麻醉后，大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元處于活躍狀態(tài)。麻醉24 h后RhoA表達(dá)增加，說明RhoA介導(dǎo)的突觸塌陷占主要地位，新的神經(jīng)突觸的建立處于抑制狀態(tài)，麻醉72 h后表達(dá)有所恢復(fù)，說明新的突觸生長(zhǎng)已經(jīng)恢復(fù)到麻醉前水平，而突觸的塌陷可能是神經(jīng)細(xì)胞重塑的表現(xiàn)。異氟醚麻醉后老年大鼠短期內(nèi)認(rèn)知能力受損，很可能是由于異氟醚麻醉對(duì)RhoA表達(dá)的影響干擾了突觸偽足的形成與塌陷。神經(jīng)形態(tài)學(xué)的變化與神經(jīng)傳導(dǎo)功能具有重要的相關(guān)性，異氟醚影響海馬區(qū)Rho蛋白家族信號(hào)傳導(dǎo)分子變化所介導(dǎo)的神經(jīng)突觸形態(tài)學(xué)改變很可能是學(xué)習(xí)記憶能力的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。

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第7篇：動(dòng)物行為學(xué)的意義范文

關(guān)鍵詞：卒中后抑郁；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究；綜述

卒中后抑郁（post stroke depression，PSD）是腦卒中后的最常見的并發(fā)癥之一，是腦卒中患者最常見的心理障礙，其患病率可高達(dá)20%～60%。卒中后抑郁可嚴(yán)重?fù)p害腦卒中患者的認(rèn)知功能，影響患者的預(yù)后情況，增加患者癡呆及自殺的風(fēng)險(xiǎn)，給患者的家庭及社會(huì)帶來沉重的壓力?，F(xiàn)將近10年關(guān)于卒中后抑郁的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展綜述如下。

1 卒中后抑郁的發(fā)病機(jī)制

PSD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及神經(jīng)生物學(xué)、解剖學(xué)和社會(huì)學(xué)、心理學(xué)等諸多因素。在20世紀(jì)80年代，Robinson等就提出，腦內(nèi)參與情感調(diào)節(jié)的5-HT能神經(jīng)元和NE能胞于腦干，其軸突通過丘腦和基底節(jié)到達(dá)額葉皮質(zhì)，腦卒中病變累及上述部位可影響5-HT能神經(jīng)元和NE能神經(jīng)元及其通路，導(dǎo)致兩種遞質(zhì)水平降低而引起抑郁。Moller等利用正電子發(fā)射型計(jì)算機(jī)斷層顯像（PET）間接估計(jì)了5-HT受體活性，研究發(fā)現(xiàn)在急性卒中后5-HT神經(jīng)遞質(zhì)出現(xiàn)代謝的異常，尤其在邊緣系統(tǒng)和中縫核5-HT代謝的顯著下降，可能與抑郁的發(fā)生相關(guān)。臨床上使用5-輕色胺再攝取抑制劑可緩解PSD的癥狀，進(jìn)一步支持PSD與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)下降有關(guān)的觀點(diǎn)。Terroni等根據(jù)MRI研究結(jié)果顯示病灶影響邊緣-皮質(zhì)-紋狀體-蒼白球-丘腦神經(jīng)環(huán)，尤其是前額葉腹側(cè)和背側(cè)扣帶回皮層、海馬、杏仁核等易產(chǎn)生PSD，且以左側(cè)為著，而這種情況未見于腦橋背部和小腦。說明前額葉背外側(cè)皮質(zhì)環(huán)路在情緒 的調(diào)節(jié)中起著重要作用，腦內(nèi)該區(qū)域白質(zhì)纖維連接的改變可能也會(huì)影響情緒調(diào)節(jié)過程。這與控制情感的神經(jīng)環(huán)路主要分布在額顳葉、邊緣系統(tǒng)和腦干腹部及其皮層下聯(lián)系纖維的研究結(jié)果相一致。有學(xué)者認(rèn)為，腦卒中"突如其來"的發(fā)生和其嚴(yán)重程度，使患者的工作和日常生活能力改變甚至喪失，導(dǎo)致患者心理應(yīng)激障礙、心理平衡失調(diào)，由此對(duì)抑郁癥的產(chǎn)生有一定的作用。

2 卒中后抑郁動(dòng)物模型的建立

有關(guān)卒中后抑郁的動(dòng)物模型的建立，近年來國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道多為復(fù)合模型即在卒中基礎(chǔ)上結(jié)合相應(yīng)應(yīng)激刺激構(gòu)建PSD模型。裘濤等[1]采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎后予以行為限制制作PSD大鼠模型，觀察大鼠自發(fā)改變，海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的變化。結(jié)果顯示：模型組大鼠水平運(yùn)動(dòng)得分、垂直運(yùn)動(dòng)得分、清潔動(dòng)作次數(shù)與假手術(shù)組比較顯著下降（P

3 針刺干預(yù)PSD大鼠的實(shí)驗(yàn)研究

卒中后抑郁患者不僅有精神障礙癥狀而且還存在肢體的活動(dòng)障礙，采用體針治療卒中后抑郁可以顯著促進(jìn)患者肢體的恢復(fù)，平衡患者臟腑的陰陽，調(diào)節(jié)患者氣血的虛實(shí)。龔燕等[13]采用單側(cè)頸總動(dòng)脈不全結(jié)扎聯(lián)合孤養(yǎng)和小劑量利血平皮下注射制備復(fù)合型PSD大鼠模型。觀察各組大鼠的行為學(xué)變化；利用熒光分光光度法測(cè)定各組大鼠大腦海馬區(qū)NE和5-HT含量。結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組大鼠糖水消耗量和腦內(nèi)NE、DA含量均明顯下降。電針能使PSD大鼠糖水消耗量和腦神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA含量明顯增加。得到的結(jié)論是：電針治療PSD大鼠的機(jī)制可能與提高其海馬區(qū)5-HT和NE含量有關(guān)。孫培養(yǎng)等[14]選擇通督調(diào)神針法干預(yù)卒中后抑郁大鼠。結(jié)果：造模完成時(shí)，模型組和針刺組蔗糖水飲用量、水平及垂直運(yùn)動(dòng)得分、血漿中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量均較正常組降低，Zea Langa神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分提高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

4 中醫(yī)藥物干預(yù)PSD大鼠的實(shí)驗(yàn)研究

中醫(yī)認(rèn)為卒中后抑郁屬于"中風(fēng)"與"郁證"范疇，由于受到軀體病殘的困擾，最終情緒抑郁。裘濤等[1]采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎后予以行為限制制作PSD大鼠模型，隨機(jī)分為模型組、滌痰開竅解郁組、氟西汀組，并設(shè)假手術(shù)組，采用RP-HPLC-熒光檢測(cè)法測(cè)定大鼠海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的變化，并觀察大鼠自發(fā)改變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠行為能力下降（P

5 西醫(yī)藥物干預(yù)PSD大鼠的實(shí)驗(yàn)研究

PSD的西醫(yī)藥物治療包括原發(fā)病、并發(fā)癥和抑郁癥的治療?；颊咭蛐柰瑫r(shí)服用治療腦卒中、高血壓或其他并發(fā)癥的藥物，故在選擇藥物時(shí)，應(yīng)選擇相互作用小的藥物，所以新型抗抑郁劑有一定優(yōu)勢(shì)，更適于神經(jīng)系統(tǒng)疾病所致繼發(fā)性抑郁的治療。趙立波等采用CUMS結(jié)合孤養(yǎng)建立抑郁模型，MCAO術(shù)建立卒中模型PSD模型組和氟西汀組大鼠先建立卒中模型后建立抑郁模型，腹腔注射相應(yīng)藥物進(jìn)行干預(yù)，連續(xù)給藥21d后，用酶聯(lián)免疫法和免疫組化SABC法檢測(cè)給藥后各組大鼠腦組織中5-HT，NE，NGF的表達(dá)。結(jié)果顯示與假手術(shù)組比較，抑郁模型組和PSD模型組大鼠腦組織中5-HT，NE，NGF表達(dá)均明顯降低（P

6 研究存在的問題及展望

綜上所述，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在論述PSD發(fā)病的因素時(shí)各有側(cè)重，具體的發(fā)病機(jī)制尚未明確。現(xiàn)在多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其發(fā)病是由多種原因通過多種機(jī)制所致，與心身疾病的生物-心理-社會(huì)醫(yī)學(xué)模式相一致，可能是神經(jīng)生物學(xué)因素和社會(huì)心理因素共同作用的結(jié)果。

目前，關(guān)于PSD的研究大多建立在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，制備的動(dòng)物模型主要以缺血性卒中為主，但卒中的發(fā)病類型包括出血性卒中和缺血性卒中，關(guān)于出血性卒中后抑郁動(dòng)物模型的制備相對(duì)較少，這方面的研究信息相對(duì)缺失。并且，一般情況下卒中后抑郁患者多合并高血壓病、血脂異常等基礎(chǔ)病，而這些在動(dòng)物模型身上無法一一體現(xiàn)；同時(shí)，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)造模、治療、取材的過程中，都有可能出現(xiàn)一些輕微的誤差，如取材的不完整性等。這些都有可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在一定的誤差，以至于影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

其次，關(guān)于卒中后抑郁治療方法頗多，有針灸、中醫(yī)藥物、西醫(yī)藥物等。腦卒中后抑郁屬于"中風(fēng)"與"郁證"范疇，運(yùn)用中醫(yī)藥物治療時(shí)，應(yīng)綜合分析患者實(shí)際病情，并概括患者分型，從而辯證論治。針灸療法治療卒中后抑郁一方面可以幫助患者殘肢的功能恢復(fù)，間接有利于患者抑郁狀態(tài)的改變，另一方面疏肝行氣、調(diào)和陰陽，又起到直接改善患者情緒的作用。西醫(yī)藥物治療PSD的治療原則是早期、單一藥物、綜合、個(gè)體化、長(zhǎng)期系統(tǒng)用藥。目前運(yùn)用較為廣泛的是：三環(huán)類抗抑郁藥、5-HT再攝取抑制劑、NE再攝取抑制劑等，但西醫(yī)藥物的使用存在一定的副作用。

因此，尋求PSD的發(fā)病機(jī)制以及制備理想的PSD模型，尋找治療PSD有效的方法是目前亟待解決的問題，相信隨著分子生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科的發(fā)展和西醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷介入，卒中后抑郁的發(fā)病機(jī)制研究正從多層次、多角度不斷深入。假以時(shí)日，肯定能提出卒中后抑郁的最佳治療方案。

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第8篇：動(dòng)物行為學(xué)的意義范文

2012年12月18日，第三屆中國(guó)野生動(dòng)物攝影高端論壇暨百名攝影家看猴島活動(dòng)在海南省陵水縣南灣猴島正式開幕。本次活動(dòng)由中國(guó)藝術(shù)研究院攝影藝術(shù)研究所、海南陵水猴島旅業(yè)發(fā)展有限公司主辦，《中國(guó)攝影家》雜志社承辦，海南省紀(jì)實(shí)攝影協(xié)會(huì)協(xié)辦。

開幕式上，中國(guó)攝影家協(xié)會(huì)副主席、中國(guó)藝術(shù)研究院攝影藝術(shù)研究所所長(zhǎng)、《中國(guó)攝影家》雜志主編李樹峰代表主辦單位單位首先致辭。在向參加此次活動(dòng)的各位攝影家表示歡迎之后，更是指出野生動(dòng)物攝影具有三方面的意義，一它是動(dòng)物行為學(xué)的田野調(diào)查與記錄；二是攝影藝術(shù)的擷取與呈現(xiàn)；三引發(fā)人們對(duì)人與自然、人與動(dòng)物關(guān)系的再思考再認(rèn)識(shí)。隨后，陵水縣副縣長(zhǎng)龍丁敏，華南師范大學(xué)生命科學(xué)院教授江海聲向到場(chǎng)的攝影家介紹了陵水縣以及南灣猴島的相關(guān)情況，著名攝影家、中國(guó)攝影家協(xié)會(huì)顧問朱憲民，著名攝影家、中國(guó)攝影家協(xié)會(huì)副主席張桐勝，海南省紀(jì)實(shí)攝影協(xié)會(huì)主席黃一鳴則分別從攝影的角度出發(fā)，希望通過此次論壇能夠號(hào)召起更多的人用相機(jī)來保護(hù)野生動(dòng)物，讓更多的社會(huì)各界更加關(guān)愛動(dòng)物保護(hù)。海南陵水猴島旅業(yè)發(fā)展有限公司董事長(zhǎng)代國(guó)夫更是結(jié)合在猴島十余年從事野生動(dòng)物保護(hù)和旅游開發(fā)工作的經(jīng)驗(yàn)，闡述了“猴為主，我為仆，游客是客”的理念，以及如何通過攝影來進(jìn)一步宣傳保護(hù)野生動(dòng)物。

南灣猴島是中國(guó)唯一的熱帶海島型獼猴自然保護(hù)區(qū)，也是海南知名旅游景區(qū)。開幕式上，中國(guó)藝術(shù)研究院攝影藝術(shù)研究所和《中國(guó)攝影家》雜志社還向南灣猴島授予了“野生動(dòng)物攝影研究培訓(xùn)創(chuàng)作基地”稱號(hào)。

中國(guó)攝影家協(xié)會(huì)副主席王達(dá)軍，全國(guó)公安攝影家協(xié)會(huì)主席馮凱文、沈陽理工大學(xué)生態(tài)環(huán)境研究室主任、生態(tài)攝影家周海翔，內(nèi)蒙古攝影家協(xié)會(huì)名譽(yù)主席王會(huì)師以及來自廣東、天津、黑龍江、江蘇等地的多位攝影家和攝影愛好者出席了開幕式。開幕式結(jié)束之后，為期三天的第三屆中國(guó)野生動(dòng)物攝影高端論壇正式拉開帷幕，而來著大江南北的百位攝影家也將走進(jìn)南灣猴島，用相機(jī)記錄猴島的美麗與和諧。

第9篇：動(dòng)物行為學(xué)的意義范文

1　材料與方法

1.1　材料　健康成年雄性Wistar大鼠68只（省動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：slxk20080002），體質(zhì)量250～300　g，隨機(jī)分為假手術(shù)組8只，傳統(tǒng)模型組及改良模型組各30只。

1.2　模型制作方法

1.2.1　改良組　大鼠用質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%水合氯醛進(jìn)行腹腔麻醉（3　ml/kg）[4]，俯臥位固定于操作臺(tái)上，消毒后剪開頸后正中皮膚約2　cm，沿正中切口鈍性逐層分離組織直到暴露第1頸椎；后再沿第1頸椎斜向內(nèi)上尋找翼孔；翼孔完全顯露后，插入自制燒灼器燒灼翼孔5～6次，2～3　s/次，造成雙側(cè)椎動(dòng)脈永久閉塞[5]，后消毒縫合組織。再將大鼠仰臥位固定，消毒后切開頸前區(qū)皮膚2　cm，沿氣管兩側(cè)逐步分離暴露雙側(cè)頸動(dòng)脈鞘，游離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，后置線系活結(jié)，消毒縫合組織，自由飲食。24　h后將大鼠仰臥位固定于操作臺(tái)上，于清醒狀態(tài)下拆開頸部縫合線，提取線結(jié)，同時(shí)夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈；夾閉10　min后松開動(dòng)脈夾造成復(fù)灌，縫合組織自由飲食。

1.2.2　傳統(tǒng)組　大鼠充分顯露翼孔后，磨鉆仔細(xì)地沿翼孔表面逐層打磨骨面，直至完全顯露穿行其中的椎動(dòng)脈，后接雙極電凝器，在顯微鏡直視下用雙極電凝充分燒灼雙側(cè)椎動(dòng)脈，造成椎動(dòng)脈永久閉塞，其余步驟同改良組。

1.2.3　假手術(shù)組　大鼠充分暴露翼孔后不燒灼，大鼠游離頸總動(dòng)脈后不系線，其余步驟同改良組。

1.3　實(shí)驗(yàn)條件　整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中用白熾燈照射使大鼠肛溫保持在（37.0±0.5）℃及每批大鼠缺血及復(fù)灌都在同一時(shí)間。

1.4　觀察指標(biāo)與方法

1.4.1　生理指征　雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉后1　min內(nèi)出現(xiàn)動(dòng)物意識(shí)喪失，眼球變白，雙側(cè)瞳孔對(duì)光反射消失，翻正反射消失，自主呼吸加快。實(shí)驗(yàn)過程中凡不符合上述標(biāo)準(zhǔn)或大鼠出現(xiàn)抽搐及死亡視為失敗。

1.4.2　行為學(xué)檢測(cè)　模型建立7　d后用Morris水迷宮進(jìn)行大鼠空間定向能力檢測(cè)。Morris水迷宮是由圓形水池，自動(dòng)攝像機(jī)及電腦分析系統(tǒng)組成。測(cè)試前將水注入池內(nèi)，水深30　cm（即水面高出站臺(tái)1　cm，使大鼠看不見站臺(tái)），水溫控制在（25±1）℃。T組、I組各隨機(jī)選出造模成功的8只大鼠與S組大鼠用于測(cè)試。整個(gè)測(cè)試過程分為兩部分：第1階段為學(xué)習(xí)階段，第1天訓(xùn)練先將大鼠放在人工平臺(tái)上適應(yīng)1　min，然后讓大鼠自由游泳尋找平臺(tái)，120　s內(nèi)未找到平臺(tái)者，實(shí)驗(yàn)者將其引至平臺(tái)。從第2天起，將大鼠從一個(gè)象限的固定位置面向池壁放入水中，讓其進(jìn)行定向航行尋找平臺(tái)。若在120　s內(nèi)未找到平臺(tái)，實(shí)驗(yàn)者將大鼠引致平臺(tái)停留10　s，記錄尋臺(tái)時(shí)間，超過120　s按120　s計(jì)算。每天上下午固定時(shí)間各訓(xùn)練1次，將兩次尋臺(tái)時(shí)間的平均值作為當(dāng)日空間學(xué)習(xí)測(cè)試的成績(jī)，共持續(xù)4　d。第2階段為測(cè)試階段，即在第5天同一時(shí)間撤去平臺(tái)，固定位置面向池壁放入大鼠，記錄大鼠第1次跨越平臺(tái)的時(shí)間即潛伏期，超過120　s按120　s計(jì)算。

1.4.3　HE染色　各組大鼠于再灌后相應(yīng)時(shí)間取大鼠麻醉后，4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液透心灌注，斷頭后取腦于視交叉后冠狀面1～4　mm之間腦組織，后固定2　h，洗滌4　h，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋。在海馬平面冠狀切片，切片厚5　μm，室溫保存。

1.5　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理　采用SPSS　11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，均數(shù)間比較采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1　大鼠制模成功率、制模時(shí)間及儀器費(fèi)用　在充分預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)組大鼠I組大鼠造模成功25只，成功率83%（25/30）；T組大鼠造模成功20只，成功率67%（20/30）；從翼孔完全暴露開始計(jì)時(shí)，到燒灼椎動(dòng)脈結(jié)束為止，I組平均燒灼時(shí)間約為31　s，T組平均燒灼時(shí)間約為612　s，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。T組儀器顯微鏡75萬，磨鉆15萬，電凝器10萬；I組電烙鐵系市場(chǎng)普通電烙鐵，約15元。

2.2　行為學(xué)及病理組織學(xué)指標(biāo)判定

2.2.1　Morris水迷宮測(cè)試　與S組相比，模型組大鼠學(xué)習(xí)階段尋臺(tái)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，而其記憶測(cè)試潛伏期也明顯長(zhǎng)于S組，I組與T組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2.2.2　HE染色　海馬組織病理學(xué)改變，S組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞核圓而規(guī)則，核膜清楚，有明顯的核仁，核膜境界清楚。模型組大量錐體細(xì)胞核不規(guī)則并固縮深染，胞漿嗜伊紅，細(xì)胞間隙明顯增大，胞漿呈空泡樣變，正常神經(jīng)元數(shù)量顯著減少（圖1）。

3　討論

全腦缺血損傷在臨床實(shí)踐中常見，因此全腦缺血再灌注模型的建立是缺血性腦損傷實(shí)驗(yàn)研究的一個(gè)重要方法。它比體外或局灶模型能夠更好地模擬臨床中出現(xiàn)的低血壓及心臟驟停等缺血模式，也更符合麻醉手術(shù)中的臨床實(shí)際。Pulisinelli等[1]在1979年首先報(bào)告了大鼠前腦缺血模型的制備，可在動(dòng)物清醒狀態(tài)下且不改變?nèi)硌鲃?dòng)力學(xué)造成大腦缺血而被廣泛重視。1984年Told采用鉆透環(huán)椎翼小孔的方法，充分暴露椎動(dòng)脈后直視下燒杓椎動(dòng)脈，其成功率幾乎達(dá)100%[6]。

在實(shí)際模型建立過程中發(fā)現(xiàn)，雖然參考了Pulsinelli的經(jīng)典方法，但利用該方法制作模型仍存在一些缺點(diǎn)，主要表現(xiàn)在：（1）為閉塞雙側(cè)椎動(dòng)脈，需要對(duì)大鼠第1頸椎內(nèi)后方的翼孔進(jìn)行研磨以暴露其中穿行的椎動(dòng)脈進(jìn)行燒灼；由于翼孔存在變異（有些大鼠開口較小或存在兩個(gè)開口），直接燒灼往往不能完全閉塞椎動(dòng)脈；且翼孔壁薄研磨，鉆透翼小孔極易傷及椎動(dòng)脈造成大出血而導(dǎo)致模型制作失敗。（2）椎動(dòng)脈阻斷方法中，電凝法需要手術(shù)顯微鏡和單極電凝，電流不易控制，過低不能燒灼椎動(dòng)脈，過高則會(huì)可損傷腦干，對(duì)動(dòng)物損傷大，還可能電傷操作者[7]；熱凝固法中需要不斷用酒精燈對(duì)針進(jìn)行加熱，如果燒灼 動(dòng)作太慢，熱能散失，反而燒針會(huì)粘破椎動(dòng)脈，引起動(dòng)物大量失血死亡。（3）經(jīng)典的Pulsinelli　4　d后分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，易造成大鼠缺血缺水死亡。針對(duì)上述缺點(diǎn)，我們對(duì)傳統(tǒng)的4-VO制作大鼠全腦缺血模型的方法進(jìn)行了改進(jìn)。首先，采用自制燒灼器直接插入翼孔反復(fù)燒灼，無需研磨骨面，儀器制作簡(jiǎn)單且損傷小。其次，自制燒灼器可持續(xù)加熱，熱量恒定，避免了熱能散失而粘破椎動(dòng)脈。再次，在動(dòng)物存活24　h后夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈，從而避免了主觀因素的影響，縮短模型制作的周期。

實(shí)驗(yàn)證明，大腦區(qū)海馬組織對(duì)缺血性損傷十分敏感，尤其是CA1區(qū)神經(jīng)元，因此，在全腦缺血模型中，CA1區(qū)神經(jīng)元成為相對(duì)獨(dú)立于其他腦區(qū)的理想的實(shí)驗(yàn)觀察對(duì)象。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，全腦缺血再灌注后大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力明顯減退。兩側(cè)海馬組織CA1區(qū)出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)元核固縮和神經(jīng)細(xì)胞丟失。這些行為學(xué)和組織病理學(xué)的變化證明我們采用的全腦缺血/再灌注損傷大鼠模型的復(fù)制是成功的。傳統(tǒng)組及改良組大鼠均成功復(fù)制全腦缺血再灌注模型。相比之下，改良組手術(shù)方法成功率高，縮短制模時(shí)間，方法簡(jiǎn)便可靠，無需特殊儀器，值得推廣。

參考文獻(xiàn)

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